Là con trai lớn nhất, Edwin Booth đã bắt đầu sự nghiệp diễn xuất giống như cha của mình. Ông bắt đầu tập kịch dưới sự chỉ đạo của cha mình, Junius Brutus Booth, một diễn viên kịch người Anh, từ năm 1849, ông đã được đóng một vai nhỏ trong vở kịch Richard III của Shakespeare. Vào năm 1851, cha ông bị bệnh và được ông thay thế, trở thành diễn viên kịch chính thức đóng vai Richard III. Ông đặc biệt nổi tiếng với các vai diễn của mình trong các vở kịch của Shakespeare, bao gồm các vai cbeth, Hamlet, Shylock và Iago.

Trong những năm 1869-1874, ông là người đứng đầu nhà hát của riêng mình tại New York.

Năm 1881, Edwin Booth, vào thời điểm đó được báo chí xưng tụng là diễn viên tốt nhất của Mỹ (tạp chí Harper's New Monthly Magazine), và ông đã có một tour diễn thành công tại Anh Quốc.